聚丙烯酰胺凝胶通过丙烯酰胺与双丙烯酰胺（甲叉）的反应形成，产生高度交联的凝胶基质。凝胶充当筛子，蛋白质在电场作用下通过这个筛子。蛋白质总体带正电或负电，这使得蛋白质分子能够朝向等电点移动，在等电点分子没有净电荷。通过使蛋白质变性并赋予它们均匀的负电荷，可以在它们向正电极迁移时基于它们的大小分离它们。
实验方案
所需电源、玻璃板、垫片和点样梳的垂直电泳室。
试剂：
| 产品编号 | 产品名称 | 质量规格 | 成分(编号） |
| PS0008 | 丙烯酰胺/甲叉溶液 | 30%,29:1 | A60072/M70194 |
| PS0128 | SDS-PAGE分离胶缓冲液 | 4× | T10006 pH8.8 |
| PS0129 | SDS-PAGE/Tris-HCL-SDS 浓缩胶缓冲液 | 4× | T10006 pH6.8 |
| PS0726 | Laemmli加样缓冲液 | 2× | B10058/M50011/G20009/S20016/T10006 |
| PS0131 | Tris-甘氨酸电泳缓冲液 | 10× | T10006/G10012/S20002 |
| PS0356 | SDS | 10% | S20002 |
| PS1137 | SDS | 10% | A30002 |
| T20005 | TEMED | 电泳级 | - |
制备凝胶
用去离子水和乙醇清洁凝胶浇注装置的玻璃板和垫片。
将玻璃板和垫片组装在稳定、平整的表面上。
根据所需凝胶的百分比，使用以下体积制备分离胶溶液（制成体积为10 mL）。
| 凝胶% | 水 (mL) | 30% 丙烯酰胺 (mL) | 分离胶缓冲液 | 10% SDS (µL) | 10% APS (µL) | TEMED*(µL) |
| 8% | 4.6 | 2.6 | 2.6 | 100 | 100 | 10 |
| 10% | 3.8 | 3.4 | 2.6 | 100 | 100 | 10 |
| 12% | 3.2 | 4.0 | 2.6 | 100 | 100 | 10 |
| 15% | 2.2 | 5.0 | 2.6 | 100 | 100 | 10 |
| * TEMED必须最后添加 |
将凝胶溶液倒入组装了垫片的玻璃板中。为了使分离凝胶表面保持均匀和水平，用水或异丙醇（I20020）间隔表面。
让凝胶在室温下凝固约20-30分钟。
使用以下体积制备浓缩胶溶液（制成体积为10 mL）：
| 凝胶% | 水 (mL) | 30% 丙烯酰胺 (mL) | 浓缩胶缓冲液 | 10% SDS (µL) | 10% APS (µL) | TEMED*(µL) |
| 5% | 5.86 | 1.34 | 2.6 | 100 | 100 | 10 |
| * TEMED必须最后添加 |
丢弃分离胶上的水。
加入5％浓缩胶溶液直至溢出。立即插入点样梳，确保凝胶中或梳齿周围没有气泡。
让凝胶在室温下凝固约20-30分钟。
样品制备
在一定体积的蛋白质样品（细胞或组织裂解液）中，加入等体积的上样缓冲液。
将上述混合物在95°C下煮沸5分钟，16000G离心5分钟。
这些样品可以在-20°C下储存，也可以用于进行凝胶电泳。
凝胶染色
考马斯蓝染色：用考马斯亮蓝G-250(PS0109）染色蛋白质凝胶是显示通过SDS-PAGE分离的蛋白质的常用方法。它非常灵敏，适合长期储存凝胶。
试剂
| 产品编号 | 产品名称 | 成分(编号） |
| PS0630 | 聚丙烯酰胺凝胶固定液 | M20001/A20002/超纯水 |
| PS01019 | 考马斯亮蓝快速染色液 | E20003/A20002/C70031/HCL/超纯水 |
| PS0107 | 常规考马斯亮蓝染色洗脱液 | E20003/A20002/超纯水 |
| PS1222 | 凝胶储存溶液 | A20002/超纯水 |
操作流程
电泳后，将凝胶放入含有凝胶固定溶液的塑料托盘中。将托盘放在摇床上固定蛋白质2小时。
丢弃凝胶固定溶液，然后加入考马斯溶液。 放在摇床上，将凝胶染色2-4小时。
染色步骤后，用蒸馏水洗涤凝胶数次，以去除多余的染料。
将脱色溶液添加到凝胶。放在摇床上脱色约4个小时，直到可以看到清晰背景上的清晰蓝色条纹。
脱色后，可将凝胶储存在凝胶储存溶液中，并根据需要拍照。
银染
操作流程
电泳后，将凝胶浸入固定溶液40分钟。在固定溶液中浸泡过夜能产生更清晰的背景。
丢弃固定溶液，用30％乙醇溶液洗涤凝胶10分钟，然后用超纯水洗涤10分钟。
倒出水，并将凝胶在敏化剂溶液中孵育10分钟。
丢弃敏化剂溶液，用水洗涤凝胶两次，每次洗涤持续10分钟。
倒出水，并将凝胶浸泡在银溶液中10分钟。
倒掉银溶液，并在水中洗涤凝胶1.5分钟。
倒掉水，将凝胶浸入显影液中3至7分钟。
向显影液中加入5 mL终止液，孵育5分钟。丢弃显影液/终止液，在超纯水中洗涤凝胶15分钟。
这时凝胶可以拍照，也可以储存在新鲜的超纯水中。
双重染色：使用考马斯亮蓝对凝胶进行染色，然后使用上述步骤进行银染色。
铜染色
为了确认蛋白质的迁移和分离，凝胶可以用可逆染色剂（如CuCl2）染色。
试剂：
0.3 M CuCl2溶液
0.25 M Tris和0.25 M EDTA溶液
操作流程
将电泳后的凝胶用蒸馏水冲洗最多30分钟。
将凝胶浸入0.3 M CuCl2溶液中10分钟。
用去离子水冲洗。
蛋白质可以在蓝色背景上显示为清晰的区域。
脱色：反复在0.25 M Tris和0.25 M EDTA溶液（pH 9）中洗涤染色的凝胶。
在进行后续的转印操作之前，将脱色后的凝胶转移至转印缓冲液中。
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